خرید خدمت ریل تایم پی سی آر

<p>خدمات ریل تام پی سی آر در نسیم تشخیص آزما</p> <p>شرکت نسیم تشخیص آزما، دارنده جدیدترین دستگاه های <span dir="LTR">Real Time PCR</span> در جهان است که تولید آن از سال 2021 به بعد است، از جمله تجهیزات موجود در شرکت، می توان به دستگاه ریل تایم پی سی آر برند آزور آمریکا (96 چاهک) اشاره کرد که بر خلاف سایر دستگاه های موجود در ایران دارای 6 کانال است و عملا قدرت اختصاصیت در تشخیص را بالا می برد.</p> <hr /> <p>دستگاه Real-Time PCR چیست؟</p> <p>دستگاه ریل تایم پی سی آر (<span dir="LTR">Realtime PCR</span>) با هدف تعیین میزان بیان ژن های موجودات زنده راه اندازی و ارتقا داده شده است.</p> <p>مراحلی که باید برای انجام یک واکنش ریل تایم پی سی آر انجام شود، مشابه مراحل واکنش <span dir="LTR">PCR</span> معمولی است با این تفاوت که در ریل تایم پی سی آر برای تولید فلورسانس جهت شناسایی و تعیین میزان محصولات تولید شده در هر چرخه باید از پروب&zwnj;های گزارشگر یا فلوئوفورها استفاده کرد.</p> <hr /> <p>انواع فلوروکروم به کار رفته در ریل تایم پی سی آر:</p> <p>سه دسته فلوروکروم در دستگاه مورد استفاده قرار می گیرد دسته ی اول گزارشگر یا <span dir="LTR">Reporter</span>&nbsp; هستند که سینگنال حاصل از آن به عنوان سیگنالی است که در دستگاه مورد آنالیز قرار می دهد، که این نوع دسته خود به دو دسته آزاد و اختصاصی تقسیم می شوند. رنگ های مثل <span dir="LTR">SYBR green</span>، <span dir="LTR">YO-PRO</span>،<span dir="LTR">SYTO9</span>، <span dir="LTR">BOXTO</span>، <span dir="LTR">LC green</span> و <span dir="LTR">Eva green</span> به عنوان رنگ های آزاد و غیر اختصاصی شناخته می شوند.</p> <p><span dir="LTR">BHQ1</span>، <span dir="LTR">TAMRA</span> دسته دوم خاموش کننده یا <span dir="LTR">Quencher</span> می باشند که وظیفه خاموش کردن و گرفتن سیگنال اولیه ی گزاگر طبق قانون <span dir="LTR">FRET</span> هستند، گزارشگر های اختصاصی و خاموش کننده شامل دسته سوم رنگ های مرجع می باشند که کار آن ها تصحیح اختلاف سیگنال ناشی از اختلاف در خوانش هر چاهک توسط دستگاه و نرمال سازی سیگنال چاهک های مورد آزمایش می باشد و با مخلوط مورد آزمایش واکنش نمی دهد.</p> <hr /> <p>انواع پروب به کار رفته در روش ریل تایم پی سی آر:</p> <p>&nbsp;<span dir="LTR">TaqMan</span> پروب</p> <p>الیگونوکلئوتید اختصاصی توالی هستند که در سر &prime;5 یک رنگ فلورسنت گزارشگر و در سر &prime;3 یک رنگ خاموش کننده حمل کند و برای اتصال به توالی درون محصول تکثیر شده یا الگو که کاملا مکمل آن است طراحی شده است. زمانی که خاموش کننده و گزارشگر در نزدیکی هم قرار دارند، پروب غیرفعال است و خاموش کننده سیگنال را از طریق سیستم <span dir="LTR">FRET</span> جذب می کند. در طول تکثیر زمانی که پلی مراز سنتز را از روی رشته آغاز می کند، با رسیدن آنزیم به پروب، فعالیت &prime;5 اگزونوکلئاز <span dir="LTR">DNA</span> پلمیراز، پروب را هیدرولیز می کند. جداشدن گزارشگر رنگ فلورسنت و خاموش کننده، به انرژی گزارشگر اجازه می دهد تا به عنوان یک سیگنال فلورسانت منتشر شود. سطح فلورسنت در هر چرخه متناسب با درصد شکست پروب افزایش می یابد، که بیانگر یه واکنش مثبت است.</p> <p><span dir="LTR">Beacon</span> پروب</p> <p>مانند پروب های <span dir="LTR">TaqMan</span> دارای رنگ فلورسنت در انتهای &prime;5 و یک مولکول خاموش گر در انتهای&prime;3 است.&nbsp; اما برخلاف <span dir="LTR">Taq Man</span> تجزيه نمي شود و در سيكلهاي بعدي دوباره مورد استفاده قرار مي گيرد.</p> <p>اين پروب قبل از اتصال به <span dir="LTR">DNA</span> به صورت لوپ است كه به آن <span dir="LTR">Stem loop structure</span> مي گويند. به علت نزديكي <span dir="LTR">Reporter</span> و <span dir="LTR">Quencher</span> نور ساطع شده توسط <span dir="LTR">Quencher</span> مهار مي شود. پس از اتصال پروب به محل موردنظر خود، ساختار <span dir="LTR">Stem loop</span> باز و در نتيجه رنگه ا از هم دور مي شوند كه نتيجه اين امر تابش نور از <span dir="LTR">Reporter</span> است.</p> <p><span dir="LTR">scorpions</span> پروب</p> <p>مانند <span dir="LTR">Beacon</span> ها ، این مولکول دارای یک ساختار سنجاق سری شامل یک گزارشگر در انتهای &prime;5 و یک خاموشگر در انتهای &prime;3 است</p> <p>توالی حلقه با قسمت داخلی از نواحی هدف روی همان رشته مکمل است، در حالتی که پروب هیبرید نشده کونفورماسیون حلقه-حلقه را حفظ می کند و هر دو رنگ در نزدیکی هم قرار می گیرد و فلورسنت منتشر شده به وسیله فلورفور توسط خاموش گر جذب می شود . پروب عقربی در بخش سوم از یک ساختار ساقه-حلقه شامل <span dir="LTR">PCR-Blocker</span> در سر &prime;3 خاموش کننده است، که مانع <span dir="LTR">Read through</span>&nbsp;&nbsp; ( انتقال پلیمراز از روی یک رشته در طول طویل سازی برروی رشته دیگر) در طول پروسه تکثیر بر روی رشته ی مخالف می شود. در طول سیکل اول تکثیر، پرایمر عقربی کشیده می شود، بعد از طویل شدن پرایمر عقربی توالی پروب اختصاصی به مکملش درون محصول تکثیریافته متصل می شود و لوپ سنجاق سری باز می شود. این جدا شدن گزارشگر فلورسنت و مولکول خاموش کننده سیگنالی با طول موج مناسب منتشر می کند.</p> <p><span dir="LTR">FRET</span> پروب</p> <p>در اين سيستم پروب به صورت دو قطعه مختلف طراحي مي شود. فلورسنت در انتهاي&nbsp; &prime;3 يك پروب و فلورسنت دیگری نیز و در انتهاي&prime;5&nbsp; پروب دیگر قرار دارد. وقتي كه اين دو دقيقاً درمحل موردنظر خودشان بچسبند نزديكي فاصله اين دو ماده باعث واكنشي به نام <span dir="LTR">FRET</span> مي شود.</p> <p>انتخاب رنگها در اين پروب به صورتي است كه طول موج ساطع شده از یک فلورسنت به عنوان محرك ماده فلورسنت دوم عمل مي كند. بنابراین پس از چسبيدن دو پروب بر روی محصولات اين رنگهای فلورسنت به هم نزديك شده و فلورسانس ساطع شده قابل اندازه گيري است. طراحي اين پروبها به نحوي است كه در صورت تفاوت حتي در يك نوكليوتيد پروب به <span dir="LTR">DNA</span> متصل نمي شود.يكي از كاربردهاي اين پروب ها در تشخيص <span dir="LTR">SNP</span> مي باشد.</p>